簡要描述：在血液中NEFA（Non-esterified Fatty Acid：游離脂肪酸）與白蛋白結合，被轉運至外周組織，成為外周組織重要的能源來源。游離脂肪酸的濃度通過脂肪組織釋放、外周組織消耗以及肝臟攝取進行調節(jié)。
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LabAssay™ NEFA
LabAssay™ you離脂肪酸檢測試劑盒
在血液中NEFA（Non-esterified Fatty Acid：游離脂肪酸）與白蛋白結合，被轉運至外周組織，成為外周組織重要的能源來源。游離脂肪酸的濃度通過脂肪組織釋放、外周組織消耗以及肝臟攝取進行調節(jié)。
本產品采用了基于?；?span style="font-family: 微軟雅黑, "Microsoft YaHei"; text-indent: 28px; background-color: rgb(255, 255, 255);">fu酶A合成酶（ACS）、?；?span style="font-family: 微軟雅黑, "Microsoft YaHei"; text-indent: 28px; background-color: rgb(255, 255, 255);">fu酶A氧化酶（ACOD）和3-甲基-N-乙基-N-（β-羥yi基）-苯胺（MEHA）的藍紫色顯色酶法。不可用于體外診斷。
◆檢測原理
樣品中的游離脂肪酸（NEFA）在酰基fu酶A（Acyl-CoA）和腺苷- 5'-三磷酸二鈉（ATP）存在下，通過?；?span style="font-family: 微軟雅黑, "Microsoft YaHei"; text-indent: 28px; background-color: rgb(255, 255, 255);">fu酶A合成酶（ACS）的作用，生成?；?span style="font-family: 微軟雅黑, "Microsoft YaHei"; text-indent: 28px; background-color: rgb(255, 255, 255);">fu酶A、AMP以及焦磷酸（PPi）。生成的?；?span style="font-family: 微軟雅黑, "Microsoft YaHei"; text-indent: 28px; background-color: rgb(255, 255, 255);">fu酶A在?；?span style="font-family: 微軟雅黑, "Microsoft YaHei"; text-indent: 28px; background-color: rgb(255, 255, 255);">fu酶A氧化酶（ACOD）的作用下被氧化，同時生成2,3-反式烯酰fu酶A（2,3-trans-Enoyl-CoA）和*。生成的*在過氧化物酶（POD）的作用下，與3-甲基-N-乙基-N-（β-羥yi基）-苯胺（MEHA）和4-氨基an替比林（4-Aminoantipyrine）進行定量氧化縮合，生成藍紫色色素。通過測定這種藍紫色的吸光度，即可計算樣品中的NEFA濃度。
◆性能
● 標準曲線范圍：0.4～1.97 mEq/L
● 檢測時間：約 20 min
● 所需樣品量：4 μL
● 測定波長：550 nm
● 檢測對象：小鼠、大鼠、人、貓、狗
● 樣品：血清、血漿、培養(yǎng)上清
◆試劑盒組成
１．顯色劑A——10 mL用×4瓶
２．顯色劑A溶解液——45 mL×1瓶
３．顯色劑B——20 mL用×4瓶
４．顯色劑B溶解液——90 mL×1瓶
５．標準溶液（油酸1 mEq/L）——7 mL×1瓶
５． ※ 油酸1 mEq/L=1 mmol
◆檢測操作方法
微孔板法
按下表條件進行反應。
No. | 標準溶液 | 蒸餾水或去離子水 | 樣品量 | 濃度 |
| 1 | 80 µL | 120 µL | 4 μL | 0.40 mEq/L |
| 2 | 120 µL | 80 µL | 4 μL | 0.60 mEq/L |
| 3 | 160 µL | 40 µL | 4 μL | 0.80 mEq/L |
| 4 | 未經稀釋 | - | 4 μL | 1.00 mEq/L |
| 5 | 未經稀釋 | - | 8 μL | 1.97 mEq/L*1 |
*1：樣品量通常是4 μL, 但在這里使用了8 μL。NEFA的濃度需要根據(jù)上表校正。
Test | 標準 | 試劑空白 | 樣品空白＊２ | |
顯色試劑 A | 80 μL | 80 μL | 80 μL | 80 μL |
待測物 | 血清 4 μL | 標準溶液 4 μL | 蒸餾水或去離子水 4 µL | ― |
充分混合＊3、37 ℃加熱10 min。 | ||||
顯色試劑 B | 160 μL | 160 μL | 160 μL | 160 μL |
待測物 | ― | ― | ― | 血清 4 μL |
充分混合＊3、37 ℃加熱10 min。 | ||||
恢復至室溫，在30 min內以空白作為對照，測定樣品和標準溶液的吸光度。 | ||||
550 nm 吸光過濾 | ||||
*2：普通的樣品無需檢測樣品空白，請對乳糜血清或溶血血清樣品進行樣品空白檢測。
*3：使用板式攪拌機，在600~1000 rpm下攪拌1 min左右。
◆加標回收測試
NEFA的加標回收測試，將已知含量的標準品加標到人、小鼠、大鼠樣品中，n=2。
人樣品
人樣品 | 添加量（mEq/L） | 測定值（mEq/L） | 回收量（mEq/L） | 回收率（%） |
血清樣品 | - | 0.69 | ||
0.4 | 1.14 | 0.45 | 111.80% | |
0.61 | 1.34 | 0.64 | 105.70% | |
0.78 | 1.54 | 0.85 | 108.50% | |
1.01 | 1.73 | 1.03 | 102.30% | |
血漿（EDTA） 樣品 | - | 0.28 | ||
0.4 | 0.7 | 0.43 | 105.30% | |
0.61 | 0.9 | 0.62 | 102.50% | |
0.78 | 1.12 | 0.84 | 106.80% | |
1.01 | 1.34 | 1.06 | 105.40% |
小鼠樣品
小鼠樣品 | 添加量（mEq/L） | 測定值（mEq/L） | 回收量（mEq/L） | 回收率（%） |
血清樣品 | - | 0.7 | ||
0.4 | 1.07 | 0.37 | 91.70% | |
0.61 | 1.31 | 0.61 | 100.10% | |
0.78 | 1.44 | 0.74 | 94.50% | |
1.01 | 1.62 | 0.92 | 91.30% | |
血漿（EDTA） 樣品 | - | 0.62 | ||
0.4 | 0.99 | 0.37 | 92.50% | |
0.61 | 1.29 | 0.68 | 111.50% | |
0.78 | 1.38 | 0.77 | 97.80% | |
1.01 | 1.62 | 1 | 99.10% |
大鼠樣品
大鼠樣品 | 添加量（mEq/L） | 測定值（mEq/L） | 回收量（mEq/L） | 回收率（%） |
大鼠血清樣品 | - | 0.57 | ||
0.4 | 1 | 0.43 | 106.40% | |
0.61 | 1.21 | 0.65 | 106.20% | |
0.78 | 1.4 | 0.83 | 106.40% | |
1.01 | 1.57 | 1.01 | 99.70% | |
大鼠血漿 （EDTA）樣品 | - | 0.41 | ||
0.4 | 0.86 | 0.45 | 111.50% | |
0.61 | 1.07 | 0.66 | 108.50% | |
0.78 | 1.27 | 0.86 | 109.50% | |
1.01 | 1.44 | 1.02 | 101.40% |
培養(yǎng)基樣品
樣品 | 添加量（mEq/L） | 測定值（mEq/L） | 回收量（mEq/L） | 回收率（%） |
50%培養(yǎng)基 +標準品 | - | 0.03 | - | - |
0.374 | 0.409 | 0.38 | 101.60% | |
0.683 | 0.71 | 0.68 | 99.60% | |
0.829 | 0.812 | 0.782 | 94.40% | |
1.013 | 1.059 | 1.03 | 101.70% |
◆樣品檢測示例
人血清樣品
測定值（mEq/L） | mean | SD | CV（%） | ||
混合人血清，男性 | 0.686 | 0.688 | 0.687 | 0.001 | 0.2 |
混合人血漿 （K2EDTA），男性 | 0.354 | 0.35 | ※0.352 | 0.003 | 0.8 |
※參考值
20%稀釋CD-1（ICR）雄性小鼠正常血清
序號 | 測定值（mEq/L） | Mean（mEq/L） | SD | CV（%） | |
1 | 1.119 | 1.117 | 1.118 | 0.001 | 0.1 |
2 | 0.783 | 0.793 | 0.788 | 0.007 | 0.9 |
3 | 0.7 | 0.731 | 0.715 | 0.022 | 3.1 |
4 | 0.795 | 0.792 | 0.794 | 0.002 | 0.2 |
5 | 0.825 | 0.833 | 0.829 | 0.005 | 0.6 |
100%CD-1(ICR)雄性小鼠正常血漿（K2EDTA）
序號 | 測定值（mEq/L） | Mean（mEq/L） | SD | CV（%） | |
1 | 0.311 | 0.308 | ※0.309 | 0.002 | 0.6 |
2 | 0.319 | 0.321 | ※0.320 | 0.002 | 0.6 |
3 | 0.202 | 0.208 | ※0.205 | 0.004 | 2 |
4 | 0.173 | 0.185 | ※0.179 | 0.008 | 4.6 |
5 | 0.293 | 0.318 | ※0.305 | 0.017 | 5.6 |
※參考值
10％稀釋雄性Sprague Dawley大鼠正常血清
序號 | 測定值（mEq/L） | Mean（mEq/L） | SD | CV（%） | |
1 | 0.3 | 0.3 | ※0.300 | 0 | 0 |
2 | 0.373 | 0.368 | ※0.371 | 0.004 | 1.1 |
3 | 0.301 | 0.277 | ※0.289 | 0.017 | 5.8 |
4 | 0.365 | 0.364 | ※0.365 | 0 | 0.1 |
5 | 0.403 | 0.362 | ※0.382 | 0.029 | 7.6 |
※參考值
100％雄性Sprague Dawley大鼠正常血漿（K2EDTA）
樣品批次 | 測定值（mEq/L） | Mean | SD | CV（%） | |
RAT432145 | 0.336 | 0.33 | ※0.333 | 0.004 | 1.2 |
RAT432146 | 0.358 | 0.354 | ※0.356 | 0.003 | 0.8 |
RAT432147 | 0.311 | 0.339 | ※0.325 | 0.02 | 6 |
RAT432148 | 0.222 | 0.214 | ※0.218 | 0.005 | 2.6 |
RAT432149 | 0.522 | 0.508 | 0.515 | 0.01 | 1.9 |
※參考值
◆樣品檢測示例
100%雄性比格犬正常血清
序號 | 測定值（mEq/L） | Mean（mEq/L） | SD | CV（%） | 年齡 | |
1 | 0.654 | 0.657 | 0.656 | 0.0027 | 0.4 | 4 |
2 | 0.642 | 0.688 | 0.665 | 0.032 | 4.8 | 6 |
3 | 0.419 | 0.431 | 0.425 | 0.009 | 2 | 6 |
4 | 0.377 | 0.383 | ※0.38 | 0.0057 | 1.5 | 11 |
5 | 0.887 | 0.877 | 0.882 | 0.007 | 0.8 | 12 |
6 | 0.604 | 0.595 | 0.599 | 0.006 | 1.1 | 6 |
7 | 0.987 | 1.025 | 1.006 | 0.0267 | 2.7 | 10 |
8 | 0.501 | 0.51 | 0.506 | 0.006 | 1.2 | 4 |
※參考值
100%雄性比格犬正常血漿（EDTA）
序號 | 測定值（mEq/L） | Mean（mEq/L） | SD | CV（%） | 年齡 | |
1 | 0.44 | 0.444 | 0.442 | 0.0033 | 0.7 | 4 |
2 | 0.419 | 0.435 | 0.427 | 0.011 | 2.6 | 6 |
3 | 0.311 | 0.306 | ※0.308 | 0.0037 | 1.2 | 10 |
4 | 0.47 | 0.487 | 0.478 | 0.0123 | 2.6 | 12 |
5 | 0.472 | 0.475 | 0.473 | 0.005 | 1 | 6 |
6 | 0.37 | 0.364 | ※0.367 | 0.0047 | 1.2 | 11 |
7 | 0.789 | 0.77 | 0.78 | 0.0133 | 1.7 | 10 |
8 | 0.439 | 0.384 | 0.411 | 0.0387 | 9.4 | 12 |
※參考值
100% 雄性短毛貓正常血清
序號 | 測定值（mEq/L） | Mean（mEq/L） | SD | CV（%） | 年齡 | |
1 | 0.709 | 0.726 | 0.717 | 0.0117 | 1.6 | 3 |
2 | 0.628 | 0.642 | 0.635 | 0.01 | 1.6 | 3 |
3 | 1.004 | 1.003 | 1.004 | 0.0053 | 0.5 | 6 |
4 | 0.974 | 0.987 | 0.981 | 0.0093 | 0.9 | 4 |
5 | 0.624 | 0.649 | 0.636 | 0.017 | 2.7 | 6 |
6 | 1.175 | 1.212 | 1.193 | 0.0267 | 2.3 | 6 |
7 | 1.086 | 0.959 | 1.022 | 0.0893 | 8.8 | 1 |
8 | 0.371 | 0.393 | ※0.382 | 0.0157 | 4.1 | 1 |
※參考值
100％雄性短毛貓正常血漿（EDTA）
序號 | 測定值（mEq/L） | Mean（mEq/L） | SD | CV（%） | 年齡 | |
1 | 1.092 | 1.107 | 1.099 | 0.0103 | 0.9 | 0.5 |
2 | 0.177 | 0.172 | ※0.174 | 0.0033 | 2 | 1 |
3 | 0.243 | 0.24 | ※0.241 | 0.0043 | 1.7 | 3 |
4 | 0.32 | 0.319 | ※0.320 | 0.0067 | 2.2 | 0.5 |
5 | 0.363 | 0.354 | ※0.359 | 0.006 | 1.7 | 3 |
6 | 0.206 | 0.189 | ※0.197 | 0.012 | 6.2 | 3 |
7 | 0.232 | 0.199 | ※0.215 | 0.024 | 11.1 | 0.5 |
8 | 0.142 | 0.12 | ※0.131 | 0.016 | 12.3 | 1 |
※參考值
◆稀釋線性度測試
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| 299-94301 | LabAssay™ NEFA LabAssay™ you離脂肪酸檢測試劑盒 | 500 tests | - | - |
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